如何给一段序列增加一个酶切位点

2024-01-16 21:04:27 117次

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2024-01-16 21:04:27

你可以设计带有酶切位点的引物，对目的基因进行PCR，就可在目的基因上引入酶切位点。

步骤：引物设计（借助软件）——合成引物（公司合成）——PCR。最重要的一个仪器就是PCR仪了，具体的加什么试剂，加多少，我想楼主应该是做分子生物学，这些应该挺清楚的了。楼主，引物一般是用软件设计，例如Primer.5，你根据你的目的基因两端的特点，设计合适的引物，然后在引物上再添加酶切位点，例如EcoRⅠ 是应用最广泛的限制性内切酶，酶切位点和切割位点如下： 5' G↓AATTC 3' 3' CTTAA↑G 5' ，你就可以在这两条引物上分别添加这几个脱氧核苷酸，这不就在引物中引入酶切位点了吗？经过PCR后引物和目的基因连在一起，酶切位点自然也连上去了。楼主，你可以根据需要，引入不同的限制性内切酶的酶切位点。

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