的方法如下:打开Primer Premier5.0在线网页进行设计引物。
输入序列(目的基因的CDS的核酸序列)。进行产物长度、引物大小等的设定。点击pick primers后得到结果。利用DNAMAN检测引物是否存在发卡结构。打开DNAMAN软件,点击primer-Load primer-From Input,输入Forward引物;点击Primer-Two Primer Complementarity-Second primer From Input,即可查看引物能否形成发卡结构。检测结果(一般选择少于四个发卡结构的引物)。满足条件的即可确定为比较好的qPCR引物,发送至公司邮箱合成即可。