1、钢环法(1)材料:白假丝酵母菌、沙保弱培养基、无菌玻片、盖玻片、钢环(带有缺 口)、石蜡。
(2)方法①用无菌镊子取无菌小培养钢环,环的两面分别蘸取熔化的固体石蜡,平置于无菌载玻片上,另取一无菌盖玻片,在酒精灯火焰上加热后覆盖于钢环上,待冷后,小培养钢圈即被固定于载玻片与盖玻片之间。
②用毛细滴管吸取融化的培养基,从钢环上端孔注入,注入量占容积的1/2即可。
③培养基冷却凝固后,用接种针挑取材料,由上端孔接种于环内培养基上。
④置湿盒内,室温或37℃下培养2—3d后,逐日观察,镜下可连续看到真菌生长过程及菌丝、孢子等特征,一般7d左右即可长好。
⑤也可不用小培养钢环,直接将融化的培养基滴于无菌玻片上,待冷凝后从周边接种材料,用盖玻片覆盖后培养,在显微镜下连续观察生长情况。
(3)结果:镜下观察可见到有胞壁增厚的厚膜孢子及假菌丝。