在引物的5端添加酶切位点一般是为了方便PCR产物的克隆和定向克隆。
通过添加酶切位点,可以在PCR产物两端引入该酶切位点,从而方便克隆到目的载体上。同时,酶切位点也可以帮助避免不需要的连接或者连接反向的情况,用于执行定向克隆时也同样十分便利。酶切位点的选择一般根据需要克隆的目的载体来确定,如果需要在目的载体中特定的酶切位点上精准克隆,则需要在引物设计中考虑到,选用嵌入这个酶切位点的引物;如果仅是需要方便克隆,则可以引入常用的一些酶切位点,比如EcoRI, HindIII, BamHI等等。需要注意的是引物的长度,以引入酶切位点后的合理长度为宜。