微生物计数方法有哪些

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微生物计数方法:血细胞计数法将稀释的菌液样品滴在血细胞计数板上,在显微镜下计算4~5个中格的细菌数,并求出每个小格所含细菌的平均数,再以此为依据,估算总菌数。

①此法的缺点是不能区分死菌和活菌。

②对压在小方格界线上的细菌,应当取平均值计数。

③此法可用于测定培养液中酵母菌种群数量的变化稀释涂布平板法每个活细菌在适宜的培养基和良好的生长条件下可以通过生长形成菌落.培养基表面生长的一个菌落,来源于样品稀释液中的一个活菌.①这一方法常用来统计样品中活菌的数目②统计的菌落数往往比活菌的实际数目低,原因是当两个活多个细胞连在一起时,平板上观察到的只是一个菌落.因此统计结果一般用菌落数而不是用活菌数来表示.③土壤、水、牛奶、食品和其他材料中所含细菌、酵母、芽孢与孢子等的数量均可用此法测定.但不适于测定样品中丝状体微生物,例如放线菌或丝状真菌或丝状蓝细菌等的营养体等.④此法若不培养成菌落,可通过将一定量的菌液均匀地涂布在玻片上的一定面积上,经固定染色后在显微镜下计数,这样又称涂片计数法.染色可用台盼蓝,台盼蓝能使死细胞染成蓝色,可分别计数死细胞和活细胞.滤膜法滤膜法是当样品中菌数很低时,可将一定体积的湖水、海水或饮用水灯样品通过膜过滤器.然后将滤膜干燥、染色,并经处理使膜透明,再在显微镜下计算膜上(或一定面积上)的细菌数.此法也可以通过培养观察形成的菌落数来推算样品中的菌数.例如测定饮用水中大肠杆菌的数目:将已知体积的水过滤后,将滤膜放在伊红美蓝培养基上培养.在该培养基上大肠杆菌的菌落呈现黑色,可根据培养基上黑色菌落的数目,计算出水样中大肠杆菌的数目.此法也是统计样品中活菌的数目.比浊法在一定范围内,菌是悬液中细胞浓度与混浊度成正比,即与光密度成正比,菌越多,光密度越大.因此可借助与分光光度计,在一定波长下,测定菌悬液的光密度,以光密度表示菌量.实验测量时一定要控制在菌浓度与光密度成正比的线性范围内,否则不准确.显微镜直接计数法在课本生物选修1生物技术实践P22中“除了上述活菌计数法外,显微镜直接计数也是测定微生物数量的常用方法.”这里说的显微镜直接计数,我认为应该是在稀释涂布的基础上不培养成菌落而通过染色的方法在显微镜下直接计数.再如滤膜法也一样,可以有两种情况.另外,微生物计数法发展迅速,多种多样的快速、简易、自动化的仪器和装置等方法可以用来统计微生物的数目微生物计数:病毒以外的微生物的计数。样品中可测到总的(死的和活的)细胞数,称为总细胞数,样品中可测到的活的细胞数称活细胞数。总细胞数可用电子仪器或直接计数法测定。含有低细胞浓度的液体样品。可以用膜过滤并在膜上对细胞染色,在显微镜下计数活细胞数的侧定。可由:(1)在计数室内测定用活体染色剂染色的样品,(2)稀释平板法,(3)菌落计数,样品中活细胞数目由接种了样品的,发育在适合培养基上的菌落数目推定。培养基和(或)培养条件的选择,可以极大地影响形成菌落的活细胞数。某些类型的细胞,趋向于丛生或链生,这些微生物的准确的活细胞计数不能用上述方法,可依据“单位体积菌落形成单位,(cotony-formingunit/ valwne)来计数。 上述方法,一般适用于大部分细菌和泡子计数,其中一些方法,’可用于某些藻类、真菌和原生动物。在显微镜下,计数迅速运动的原生动物,可以用粘性悬浮培养基,如2-5I甲基纤维素。降低它们的运动逮度。

其他答案

微生物计数的方法主要有两大类,一类是非培养的原位计数法,一类是培养后的计数法。

非培养的原位计数法,将适当稀释的菌悬液滴在细胞计数板上(2微升,需要体积准确),在显微镜下,通过显微镜观察计数板每个小格子里的细胞数量,统计出计数板上所有的细胞量。再根据稀释倍数和液滴的体积计算出原样品中1毫升中含有多少细菌细胞。

细菌细胞培养后计数方法有两种,一种是固体培养法(CFU),另一种是液体培养法(MPN)。

CFU法是梯度稀释培养法,将样品进行10倍的梯度稀释,通常环境样品稀释至10的-8次幂,细胞比较好的分散度。两所有的稀释样品取100微升均匀涂布在预制好的固体培养基平板上(2-3个平行),然后置于适当的温度(一般是25-30°)培养过夜,观察所有的平板菌落生长情况,分散均匀的基本就是一个菌落就是一个细胞形成的,计数菌落就是样品中的细胞数量,计数平板选择生长数量在100个菌落左右的平板比较准确。将平板菌落数×稀释倍数就得到原环境细胞数量。

MPN是细胞绝迹稀释法,将样品进行10倍的梯度稀释,稀释程度适当增加3-5个梯度,即一般稀释至10的-10至-12次幂。将每个稀释液分别取100微升转接入3个平行的液体培养基(3-5毫升)中,置于适当温度(一般25-30°),过夜培养。观察所有的稀释培养试管,记录绝迹生长最后三个稀释度的情况,查MPN统计表,将查表数值×稀释梯度,获得原样品细菌细胞数量。

最后说明,非培养的计数方法,是包含活细胞和死细胞的全部细胞的计数方法,而培养的计数方法,则是活细胞的计数方法。其中CPU法比MPN法准确,MPN法更具有现场操作的便捷性,各有优缺点,根据需要灵魂选择。

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