设计甲基化引物需要考虑几个关键因素：目标DNA序列、引物长度、Tm值（退火温度）和GC含量。
首先，选择一段包含CpG二核苷酸的目标DNA序列，这是甲基化的热点区域。然后，使用在线工具如Primer3或Beacon Designer来设计引物。确保引物长度在18-27个碱基之间，Tm值在60-65°C范围内，并且GC含量在40%-60%之间。此外，避免引物内部二级结构的形成，并确保引物与目标DNA序列的特异性结合。最后，验证引物的特异性，以确保它们只与目标DNA序列结合，而不是其他相似的序列。
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