1.组织培养就是取其植物茎尖、花药或叶片组织进行植株培养的方法,简称为组培。
(1)取种苗培养体:从母枝上取其茎尖分生组织作为外植体,小于0.3毫米时可得到脱毒苗,用70%酒精漂洗一下,用0.1%新洁尔灭浸泡15~20分钟,再用1%过氧乙酸泡2~5分钟,然后移到超净台上操作。
(2)接种:就是在超净台上用无菌水冲洗3次,置于双筒解剖镜下进行剥离,挑出生长点,放入事先做好的培养基中。
(3)继代培养:为增加无病毒苗的再生植株培养,可以进行数次继代培养,待茎、叶分化长满瓶后即可分成数株,于新鲜培养基瓶内加以培养。于早春1~2月集中一批试管苗,诱导发根,使其下一步移栽整齐度高,秋季再行第二批发根。
(4)试管苗温室驯化阶段:发根的试管苗移至15℃~20℃,80%~100%空气湿度的温室中栽培,待苗长出5~6片叶时为止,此段时间需2~3个月,这就是无病毒原种苗。将无病毒原种苗簃到大田栽培,就是无公害生态造林。
2.热处理小茎尖组培取材,经过热处理脱毒效果更佳其原理是:高温下植物细胞继续生长而病毒钝化不能生长。
当置于35℃~40℃的高温下持续1个多月后,病毒自然消失。热处理方法:将试材放于35℃温箱中,温度每天升高1℃,1周后达38℃,处理1~2个月,不同类型的病毒,处理时间不同,如皱叶病50天即可去除病毒;
又如苹果的许多种病毒能耐38℃高温,一般是采用变温处理,把苗先放人38℃下处理14天,然后放入46℃下,每天8小时,处理7周,最后放在50℃高温下每天2小时,处理3天。
通常枝芽均可进行热处理,其无病毒芽多生长在枝条顶端20~30厘米的第4~第8个芽中。为获得无病毒的枝条,时间为期5周,并在特制的房间内进行不同浊度的处理,要求人工或自然光照达6000勒克斯,相对湿度50%~90%。