问脱毒苗的培养方法

1.组织培养就是取其植物茎尖、花药或叶片组织进行植株培养的方法，简称为组培。

(1)取种苗培养体：从母枝上取其茎尖分生组织作为外植体，小于0.3毫米时可得到脱毒苗，用70%酒精漂洗一下，用0.1%新洁尔灭浸泡15~20分钟，再用1%过氧乙酸泡2~5分钟，然后移到超净台上操作。

(2)接种：就是在超净台上用无菌水冲洗3次，置于双筒解剖镜下进行剥离，挑出生长点，放入事先做好的培养基中。

(3)继代培养：为增加无病毒苗的再生植株培养，可以进行数次继代培养，待茎、叶分化长满瓶后即可分成数株，于新鲜培养基瓶内加以培养。于早春1~2月集中一批试管苗，诱导发根，使其下一步移栽整齐度高，秋季再行第二批发根。

(4)试管苗温室驯化阶段：发根的试管苗移至15℃~20℃，80%~100%空气湿度的温室中栽培，待苗长出5~6片叶时为止，此段时间需2~3个月，这就是无病毒原种苗。将无病毒原种苗簃到大田栽培，就是无公害生态造林。

2.热处理小茎尖组培取材，经过热处理脱毒效果更佳其原理是：高温下植物细胞继续生长而病毒钝化不能生长。

当置于35℃~40℃的高温下持续1个多月后，病毒自然消失。热处理方法：将试材放于35℃温箱中，温度每天升高1℃，1周后达38℃，处理1~2个月，不同类型的病毒，处理时间不同，如皱叶病50天即可去除病毒；

又如苹果的许多种病毒能耐38℃高温，一般是采用变温处理，把苗先放人38℃下处理14天，然后放入46℃下，每天8小时，处理7周，最后放在50℃高温下每天2小时，处理3天。

通常枝芽均可进行热处理，其无病毒芽多生长在枝条顶端20~30厘米的第4~第8个芽中。为获得无病毒的枝条，时间为期5周，并在特制的房间内进行不同浊度的处理，要求人工或自然光照达6000勒克斯，相对湿度50%~90%。