问LB培养基怎样配制

LB培养基，是微生物学实验中最常用的培养基，用于培养大肠杆菌等细菌，其分为液态或是加入琼脂制成的固态培养基。加入抗生素的 LB 培养基可用于筛选以大肠杆菌为宿主的克隆。

尽管该培养基的名称被广泛解释为Luria-Bertani 培养基，然而根据其发明人贝尔塔尼(Giuseppe Bertani)的说法，这个名字来源于英语的 lysogeny broth，即溶菌肉汤。

LB培养基的配制：

成分

胰蛋白胨(tryptone)

10g

酵母提取物(yeast extract)

5g

氯化钠(NaCl)

10g

固体培养基另加 琼脂粉 15-20g

加双蒸水至1000mL, 用5mol/L NaOH（约0.2ml）调pH至7.2，121℃灭菌30min

配制方法

（1）称量 分别称取所需量的胰化蛋白胨、酵母提取物和NaCl，置于烧杯中。

（2）溶化 加入所需水量2/3的蒸馏水于烧杯中，用玻棒搅拌，使药品全部溶化。

（3）调pH 用1mol/L NaOH溶液调pH至7.2。

（4）定容 将溶液倒入量筒中，加水至所需体积。

（5）加琼脂 加入所需量琼脂，加热融化，补足失水。

（6）分装、加塞、包扎。

（7）高压蒸汽灭菌100Pa灭菌20min。

LB培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，有时又称普通培养基，含有酵母提取物、胰化蛋白胨和NaCl。

酵母提取物：酵母经破壁后将其中蛋白质、核酸、维生素等抽提，再经生物酶解的富含小分子的氨基酸、肽、核苷酸、维生素等天然活性成分的淡黄色粉末，其中氨基酸含量30%以上，总蛋白50%以上，核苷酸10%以上，广泛用作生物培养基和食品调味品制造原料。

胰化蛋白胨：一种优质蛋白胨，是以新鲜牛肉和牛骨经胰酶消化，浓缩干燥而成的白色粉末，含有丰富的氮源、氨基酸等。

酵母提取物为微生物提供碳源、能源、磷酸盐、生长因子、维生素等;蛋白胨主要提供氮源;NaCl主要提供微生物生长环境(如渗透压)，其次是提供无机盐。

在配制固体培养基时还要加入一定量琼脂作凝固剂。琼脂在常用浓度下96℃时溶化，一般实际应用时在沸水浴中或垫以石棉网直接煮沸溶化。琼脂在40℃时凝固，通常不被微生物分解利用。

LB培养基是一种常用的菌落计数和菌落分离的通用培养基，配方简单，制备相对容易。一般的LB培养基配方是（以1升为例）：

1. 水 1000mL

2. 液体培养基粉（LB Broth）25g 或 固体培养基粉（LB Agar）40g

3. 食品级琼脂或猪胶（如果制备的是固体LB培养基）

以上材料按照配方比例称量，加入烧杯中，在磁力搅拌器上加热并搅拌，直至完全溶解。如果需要得到固体LB培养基，可在上述配方里将液体培养基粉（LB Broth）替换成相同重量的固体培养基粉（LB Agar）。然后在配好的液体培养基中加入琼脂或猪胶（约20g/L），混合均匀后，进行预热和灭菌，最终得到的就是完整的LB培养基。

注意事项：配制前要先预热培养基试剂盒，并根据菌株生长所需的温度和时间进行培养。如果您不确定培养条件和培养时间，请参考所选菌株的相关文献或厂家说明书。