一般来说,细胞的计数方法是:细胞数/mL=4个大格细胞总数/4×10000×稀释倍数操作步骤:
1. 取10ul细胞悬液与10ul台盼兰混合均匀于1.5ml离心管中。
2.盖上盖玻片,取10ul混合液自血球计数盘上方加入,于10倍生物显微镜下观察,活细胞不染色,死细胞被染成蓝色。
3.分别计数四个大方格,得到细胞总数,再除以4,乘以稀释倍数(本实验为2),最后乘以104,即为每ml细胞悬液中细胞数。若细胞位于线上,只计上线与左线(计上不计下,计左不计右)。注:
1. 细胞数/ml=4大格细胞总数×稀释倍数×104/4;每一大格的体积为=0.1cm×0.1cm×0.01cm=10-4ml2.计数板计数时,最适细胞浓度为5~10×105个/ml,此范围外计数误差偏大。
3.高浓度细胞悬液,可取出部分作稀释或连续稀释后计数。例活细胞数/方格:55;62;49;59;死细胞数/方格:5;3;4;6;细胞总数=243平均细胞数/方格=60.75;稀释倍数=2;细胞数/ml:60.75×104×2=1.22×106;细胞数/flask(10ml):
1. 22×106×10ml=12.2×106存活率:225/243﹦92.6%